Herfurth E, Pilling U, Wittmann-Liebold B
Max-Planck-Institut für Molekulare Genetik, Abteilung Wittmann, Berlin.
Biol Chem Hoppe Seyler. 1991 May;372(5):351-61. doi: 10.1515/bchm3.1991.372.1.351.
Proteins and large peptides were degraded with phenylisothiocyanate (PITC) in the horizontal flow-through-reactor of the Modular Knauer Sequencer (Fischer, S., Reimann, F. & Wittmann-Liebold, B. (1989) in Methods in Protein Sequence Analysis (Wittmann-Liebold, B., ed.) Springer-Verlag, Berlin, pp. 98-107) by the wet-phase filter technique (Wittmann-Liebold, B. (1988) J. Prot. Chem. 7, 224-225) employing polyvinylidene difluoride (PVDF) membranes without polybrene. In order to prevent losses of small peptides during solvent washes at the degradation, 1.4-phenylene diisothiocyanate (DITC) derivatized PVDF support (MilliGen, Burlington, MA) was used to covalently attach the peptide via its lysine groups in situ within the cross-flow reaction chamber onto this membrane (Herfurth, E., Pilling, U. & Wittmann-Liebold, B. (1990) J. Prot. Chem. 9, 267). We found these membranes very suitable for peptide degradations in the Knauer sequencer. In almost all cases we were able to identify the amino-acid residues of the peptide up to its last covalent fixation point to the membrane.
蛋白质和大肽在模块化克瑙尔测序仪的水平流通式反应器中用异硫氰酸苯酯（PITC）进行降解（菲舍尔，S.，赖曼，F.和维特曼 - 利博尔德，B.（1989年），载于《蛋白质序列分析方法》（维特曼 - 利博尔德，B.编），施普林格出版社，柏林，第98 - 107页），采用湿相过滤技术（维特曼 - 利博尔德，B.（1988年），《蛋白质化学杂志》7，224 - 225），使用不含聚凝胺的聚偏二氟乙烯（PVDF）膜。为防止降解过程中溶剂洗涤时小肽的损失，使用1,4 - 亚苯基二异硫氰酸酯（DITC）衍生的PVDF支持物（MilliGen，马萨诸塞州伯灵顿），通过其赖氨酸基团在错流反应室内将肽原位共价连接到该膜上（赫富特，E.，皮林，U.和维特曼 - 利博尔德，B.（1990年），《蛋白质化学杂志》9，267）。我们发现这些膜非常适合在克瑙尔测序仪中进行肽降解。在几乎所有情况下，我们都能够鉴定出肽的氨基酸残基，直至其与膜的最后一个共价固定点。
