Research Institute for Agricultural Microbiology, College of Life and Environment Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai, 200234, China.
Virus Res. 2010 Mar;148(1-2):17-23. doi: 10.1016/j.virusres.2009.11.015. Epub 2009 Nov 29.
NS3 of pestiviruses contains a protease domain and a RNA helicase/NTPase domain. Contradictory results have been reported regarding NS3 in RNA synthesis. To investigate the effect of NS3 on classical swine fever virus (CSFV) NS5B RNA-dependent RNA polymerase activity (RdRp) activity and NS3-NS5B interaction, RdRp reactions, GST-pull-down assays and co-immunoprecipitation analyses containing NS5B and either of NS3 protein and the different truncated NS3 mutants were performed, respectively. We found that NS3 stimulated NS5B RdRp activity in a dose-dependent manner by binding to NS5 through a NS3 protease domain. Furthermore, mapping important regions of the NS3 protease domain was carried out by deletion mutagenesis, associated with RdRp reactions, GST-pull-down assays and co-immunoprecipitation analyses. Results showed that stimulation of CSFV NS5B RdRp activity was obtained by NS3 binding to NS5B through a 31-amino acid fragment at the N-terminal end of NS3 protease domain, which mediated a specific NS3-NS5B interaction.
瘟病毒 NS3 包含一个蛋白酶结构域和一个 RNA 解旋酶/NTP 酶结构域。关于 NS3 在 RNA 合成中的作用，已有相互矛盾的结果报道。为了研究 NS3 对猪瘟病毒（CSFV） NS5B RNA 依赖性 RNA 聚合酶活性（RdRp）和 NS3-NS5B 相互作用的影响，进行了包含 NS5B 和 NS3 蛋白的 GST 下拉测定和免疫共沉淀分析，以及不同的截短 NS3 突变体。我们发现 NS3 通过与 NS5 结合的 NS3 蛋白酶结构域，以剂量依赖的方式刺激 NS5B RdRp 活性。此外，还通过删除突变进行了 NS3 蛋白酶结构域重要区域的作图，与 RdRp 反应、GST 下拉测定和免疫共沉淀分析相关。结果表明，通过 NS3 与 NS5B 结合，刺激 CSFV NS5B RdRp 活性，该结合是通过 NS3 蛋白酶结构域 N 端的 31 个氨基酸片段介导的，这介导了特定的 NS3-NS5B 相互作用。
