Division of Biology 147-75, California Institute of Technology, Pasadena, CA 91125, USA.
Mol Biol Cell. 2010 Mar 15;21(6):926-35. doi: 10.1091/mbc.e09-11-0958. Epub 2010 Jan 28.
Rad17 is critical for the ATR-dependent activation of Chk1 during checkpoint responses. It is known that Rad17 loads the Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1) complex onto DNA. We show that Rad17 also mediates the interaction of 9-1-1 with the ATR-activating protein TopBP1 in Xenopus egg extracts. Studies with Rad17 mutants indicate that binding of ATP to Rad17 is essential for the association of 9-1-1 and TopBP1. Furthermore, hydrolysis of ATP by Rad17 is necessary for the loading of 9-1-1 onto DNA and the elevated, checkpoint-dependent accumulation of TopBP1 on chromatin. Significantly, a mutant 9-1-1 complex that cannot bind TopBP1 has a normal capacity to promote elevated accumulation of TopBP1 on chromatin. Taken together, we propose the following mechanism. First, Rad17 loads 9-1-1 onto DNA. Second, TopBP1 accumulates on chromatin in a manner that depends on both Rad17 and 9-1-1. Finally, 9-1-1 and TopBP1 dock in a Rad17-dependent manner before activation of Chk1.
Rad17 在检查点反应中对 ATR 依赖性的 Chk1 激活至关重要。已知 Rad17 将 Rad9-Hus1-Rad1（9-1-1）复合物加载到 DNA 上。我们表明 Rad17 还介导了 9-1-1 与 ATR 激活蛋白 TopBP1 在非洲爪蟾卵提取物中的相互作用。使用 Rad17 突变体的研究表明，Rad17 与 ATP 的结合对于 9-1-1 和 TopBP1 的结合是必需的。此外，Rad17 水解 ATP 对于将 9-1-1 加载到 DNA 上以及提高、检查点依赖性的 TopBP1 在染色质上的积累是必要的。重要的是，不能结合 TopBP1 的突变 9-1-1 复合物具有正常的能力促进 TopBP1 在染色质上的高积累。总之，我们提出了以下机制。首先，Rad17 将 9-1-1 加载到 DNA 上。其次，TopBP1 以依赖 Rad17 和 9-1-1 的方式在染色质上积累。最后，在 Chk1 激活之前，9-1-1 和 TopBP1 以 Rad17 依赖性的方式对接。
