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利用基因工程激酶筛选新型蛋白激酶底物：在外源激酶存在下对细胞裂解物中的底物进行磷酸化

Using genetically engineered kinases to screen for novel protein kinase substrates: phosphorylation of substrates in cell lysates with exogenous kinase.

作者信息

Eblen Scott T, Kumar N Vinay, Weber Michael J

出版信息

CSH Protoc. 2007 Apr 1;2007:pdb.prot4639. doi: 10.1101/pdb.prot4639.

DOI:10.1101/pdb.prot4639
PMID:21357058
Abstract

INTRODUCTIONThis protocol describes a method for detection of direct substrates of a protein kinase in cell lysates or fractions. The approach involves the addition of recombinant mutant kinase and [γ-(32)P]ATP analog to cell lysates. This technique has been successfully used for the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 2 (ERK2) substrates in cell lysates from SKOV-3 ovarian cells; however, the methodology can be applied to other protein kinases as well.

摘要

引言

本方案描述了一种检测细胞裂解物或组分中蛋白激酶直接底物的方法。该方法包括向细胞裂解物中添加重组突变激酶和[γ-(32)P]ATP类似物。此技术已成功用于检测SKOV-3卵巢癌细胞裂解物中细胞外信号调节激酶2（ERK2）的底物磷酸化；然而，该方法也可应用于其他蛋白激酶。

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