University Nice Sophia Antipolis, Institute of Signalling, Developmental Biology and Cancer Research, UMR Centre National de la Recherche Scientifique, Nice, France.
Am J Physiol Cell Physiol. 2011 Sep;301(3):C609-18. doi: 10.1152/ajpcell.00506.2010. Epub 2011 May 18.
Most melanoma cells are characterized by the V600E mutation in B-Raf kinase. This mutation leads to increased expression of interleukin (CXCL8), which plays a key role in cell growth and angiogenesis. Thus CXCL8 appears to be an interesting therapeutic target. Hence, we performed vaccination of mice with GST-CXCL8, which results in a reduced incidence of syngenic B16 melanoma cell xenograft tumors. We next addressed the molecular mechanisms responsible for aberrant CXCL8 expression in melanoma. The CXCL8 mRNA contains multiples AU-rich sequences (AREs) that modulate mRNA stability through the binding of tristetraprolin (TTP). Melanoma cell lines express very low TTP levels. We therefore hypothesized that the very low endogenous levels of TTP present in different melanoma cell lines might be responsible for the relative stability of CXCL8 mRNAs. We show that TTP is actively degraded by the proteasome and that extracellular-regulated kinase inhibition results in TTP accumulation. Conditional expression of TTP in A375 melanoma cells leads to CXCL8 mRNA destabilization via its 3' untranslated regions (3'-UTR), and TTP overexpression reduces its production. In contrast, downregulation of TTP by short hairpin RNA results in upregulation of CXCL8 mRNA. Maintaining high TTP levels in melanoma cells decreases cell proliferation and autophagy and induces apoptosis. Sorafenib, a therapeutic agent targeting Raf kinases, decreases CXCL8 expression in melanoma cells through reexpression of TTP. We conclude that loss of TTP represents a key event in the establishment of melanomas through constitutive expression of CXCL8, which constitutes a potent therapeutic target.
大多数黑色素瘤细胞的特征是 B-Raf 激酶中的 V600E 突变。这种突变导致白细胞介素（CXCL8）的表达增加，CXCL8 在细胞生长和血管生成中起着关键作用。因此，CXCL8 似乎是一个有趣的治疗靶点。因此，我们用 GST-CXCL8 对小鼠进行了疫苗接种，结果导致同源 B16 黑色素瘤细胞异种移植肿瘤的发病率降低。接下来，我们研究了导致黑色素瘤中 CXCL8 异常表达的分子机制。CXCL8 mRNA 包含多个 AU 丰富序列（AREs），通过结合三肽重复蛋白（TTP）来调节 mRNA 的稳定性。黑色素瘤细胞系表达的 TTP 水平非常低。因此，我们假设不同黑色素瘤细胞系中存在的非常低的内源性 TTP 水平可能是导致 CXCL8 mRNA 相对稳定的原因。我们表明，TTP 被蛋白酶体积极降解，细胞外调节激酶抑制导致 TTP 积累。在 A375 黑色素瘤细胞中条件表达 TTP 会导致 CXCL8 mRNA 通过其 3'非翻译区（3'-UTR）不稳定，并通过 TTP 过表达减少其产生。相反，短发夹 RNA 下调 TTP 会导致 CXCL8 mRNA 的上调。在黑色素瘤细胞中维持高 TTP 水平会降低细胞增殖和自噬并诱导细胞凋亡。索拉非尼是一种靶向 Raf 激酶的治疗药物，通过重新表达 TTP 降低黑色素瘤细胞中的 CXCL8 表达。我们得出结论，通过 CXCL8 的组成型表达导致 TTP 的丢失是黑色素瘤发生的关键事件，这构成了一个有效的治疗靶点。
