基于双荧光素酶报告系统的体内加工分析以评估DROSHA酶活性。

In vivo processing assay based on a dual-luciferase reporter system to evaluate DROSHA enzymatic activity.

作者信息

Bilan Vera, Allegra Danilo, Kuchenbauer Florian, Mertens Daniel

机构信息

Internal Medicine III, University of Ulm, Ulm, Germany.

出版信息

Methods Mol Biol. 2014;1095:87-93. doi: 10.1007/978-1-62703-703-7_6.

DOI:10.1007/978-1-62703-703-7_6

PMID:24166304

Abstract

Luciferase reporter assays are widely used to study promoter activity, transcription factors, intracellular signaling, protein interactions (Jia et al., PloS One 6:e26414), miRNA processing (Allegra and Mertens, Biochem Biophys Res Commun 406:501-505), and target recognition (Jin et al., Methods Mol Biol 936:117-127). Here we describe the use of a dual-luciferase reporter system to evaluate the enzymatic activity of a key enzyme involved in RNA maturation-DROSHA. This dual system is a simple and fast method for the quantification of the DROSHA processing activity in live cells.

摘要

荧光素酶报告基因检测被广泛用于研究启动子活性、转录因子、细胞内信号传导、蛋白质相互作用（Jia等人，《公共科学图书馆·综合》6：e26414）、微小RNA加工（Allegra和Mertens，《生物化学与生物物理研究通讯》406：501 - 505）以及靶标识别（Jin等人，《分子生物学方法》936：117 - 127）。在此，我们描述了使用双荧光素酶报告基因系统来评估参与RNA成熟的关键酶——DROSHA的酶活性。这个双系统是一种简单快速的方法，用于定量活细胞中DROSHA的加工活性。