Fouqué Amélie, Legembre Patrick
Centre Eugène Marquis, rue Bataille Flandres Dunkerque, 35042, Rennes, France.
INSERM ERL440-OSS, Equipe Labellisée Ligue Contre Le Cancer, Rennes, France.
Methods Mol Biol. 2017;1557:103-110. doi: 10.1007/978-1-4939-6780-3_10.
CD95 is a plasma membrane receptor that belongs to the TNF receptor family (Itoh and Nagata, J Biol Chem 268(15):10932-10937, 1993; Trauth et al., Science 245(4915):301-305, 1989). Accumulating evidence indicate that this so-called death receptor can also trigger non-apoptotic signaling pathways promoting inflammation and oncogenesis (Barnhart et al., Embo J 23(15):3175-3185, 2004; Chen et al., Nature 465(7297):492-496, 2010; Legembre et al., Cell Cycle 3(10):1235-1239, 2004; Legembre et al., EMBO Rep 5(11):1084-1089, 2004; Malleter et al., Cancer Res 73(22):6711-6721, 2013; Tauzin et al., PLoS Biol 9(6):e1001090, 2011). We and others demonstrated that CD95 implements the PI3K signaling pathway through the formation of a molecular complex designated Motility Inducing Signaling Complex (MISC) contributing to cell survival, growth, proliferation, differentiation and motility (Malleter et al., Cancer Res 73(22):6711-6721, 2013; Tauzin et al., PLoS Biol 9(6):e1001090, 2011; Kleber et al., Cancer Cell 13(3):235-248, 2008). This chapter describes how to immunoprecipitate CD95 to characterize MISC involved in PI3K activation.
CD95是一种质膜受体,属于肿瘤坏死因子受体家族(伊藤和永田,《生物化学杂志》268(15):10932 - 10937,1993年;特劳特等人,《科学》245(4915):301 - 305,1989年)。越来越多的证据表明,这种所谓的死亡受体也能触发促进炎症和肿瘤发生的非凋亡信号通路(巴恩哈特等人,《欧洲分子生物学组织杂志》23(15):3175 - 3185,2004年;陈等人,《自然》465(7297):492 - 496,2010年;勒让布尔等人,《细胞周期》3(10):1235 - 1239,2004年;勒让布尔等人,《欧洲分子生物学组织报告》5(11):1084 - 1089,2004年;马勒泰尔等人,《癌症研究》73(22):6711 - 6721,2013年;陶赞等人,《公共科学图书馆·生物学》9(6):e1001090,2011年)。我们和其他人证明,CD95通过形成一种名为运动诱导信号复合物(MISC)的分子复合物来实现PI3K信号通路,该复合物有助于细胞存活、生长、增殖、分化和运动(马勒泰尔等人,《癌症研究》73(22):6711 - 6721,2013年;陶赞等人,《公共科学图书馆·生物学》9(6):e1001090,2011年;克莱伯等人,《癌细胞》13(3):235 - 248,2008年)。本章描述了如何免疫沉淀CD95以表征参与PI3K激活的MISC。