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构建并鉴定水稻(籼稻品种 Nipponbare)基因的 RNA 干扰敲低系。

Construction and characterization of a knock-down RNA interference line of in rice ( ssp cv Nipponbare).

机构信息

Laboratoire Génome et Développement des Plantes, Université de Perpignan Via Domitia, 52, Avenue Paul alduy, 66860 Perpignan Cedex, France.

Laboratoire Génome et Développement des Plantes, Centre National de la Recherche Scientifique, 52, Avenue Paul alduy, 66860 Perpignan Cedex, France.

出版信息

Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2020 Mar 30;375(1795):20190338. doi: 10.1098/rstb.2019.0338. Epub 2020 Feb 10.

Abstract

In plants, RNA-directed DNA methylation (RdDM) is a silencing mechanism relying on the production of 24-nt small interfering RNAs (siRNAs) by RNA POLYMERASE IV (Pol IV) to trigger methylation and inactivation of transposable elements (TEs). We present the construction and characterization of , a knock-down RNA interference line of gene that encodes the largest subunit of Pol IV in rice ( ssp cv Nipponbare). We show that displays a lower accumulation of transcripts, associated with an overall reduction of 24-nt siRNAs and DNA methylation level in all three contexts, CG, CHG and CHH. We uncovered new insertions of known active TEs, the LTR retrotransposons and and the long interspersed nuclear element-type retrotransposon However, we did not observe any clear developmental phenotype, contrary to what was expected for a mutant severely affected in RdDM. In addition, despite the presence of many putatively functional TEs in the rice genome, we found no evidence of global reactivation of transposition. This knock-down of likely led to a weakly affected line, with no effect on development and a limited effect on transposition. We discuss the possibility that a knock-out mutation of would cause sterility in rice. This article is part of a discussion meeting issue 'Crossroads between transposons and gene regulation'.

摘要

在植物中,RNA 指导的 DNA 甲基化(RdDM)是一种沉默机制,依赖于 RNA 聚合酶 IV(Pol IV)产生 24 个核苷酸的小干扰 RNA(siRNA),从而触发转座元件(TEs)的甲基化和失活。我们构建并表征了一个基因的 RNA 干扰敲低系,该基因编码水稻(ssp cv Nipponbare)Pol IV 的大亚基。我们表明,显示出较低的转录本积累,与所有三种 CG、CHG 和 CHH 上下文的 24 个核苷酸 siRNA 和 DNA 甲基化水平的整体降低相关。我们发现了已知活性 TEs 的新插入,LTR 反转录转座子 和 和长散布核元件型反转录转座子 。然而,我们没有观察到任何明显的发育表型,与 RdDM 严重受影响的突变体所预期的情况相反。此外,尽管水稻基因组中存在许多假定具有功能的 TEs,但我们没有发现 整体转座重新激活的证据。这种 的敲低可能导致了一条弱表现系,对发育没有影响,对转座的影响有限。我们讨论了 的敲除突变可能导致水稻不育的可能性。本文是“转座子与基因调控的交叉点”讨论会议议题的一部分。

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