佝偻病大鼠骨骺软骨碱性磷酸酶的纯化及部分氨基酸序列分析

Purification and partial amino acid sequencing of alkaline phosphatase from rachitic rat epiphyseal cartilage.

Hsu H H, Rouse J, Hamilton J, Anderson H C

Department of Pathology and Oncology, University of Kansas Medical Center, Kansas City 66103.

Int J Biochem. 1988;20(11):1285-90. doi: 10.1016/0020-711x(88)90233-9.

Abstract

Alkaline phosphatase of rachitic epiphyseal cartilage was purified to apparent homogeneity by sequential application of monoclonal affinity, DEAE-cellulose, and Sepharose CL-6B chromatography. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis of the enzyme showed the presence of a dominant band corresponding to a molecular weight of 80,000. 2. The N-terminal amino acid sequence was determined as follows: Phe-Val-Pro-Glu-Lys5-Glu-Lys-Asp-Pro-Ser10-Tyr-Trp-Arg-Gln-+ ++Gln15-Ala-Gln-Glu- Thr-Leu20-Lys-Asn-Ala-Leu-Lys25-Leu-Gln-Lys-?-Asn-Val-Asn-?- Ala-Lys35-?-Ile-?- Met-Phe40-Leu-(Gly?)-Asp-(Ala/Gly?)-Met45-?-Val-?- (Val/Gly?).

摘要

通过依次应用单克隆亲和色谱、DEAE - 纤维素色谱和琼脂糖CL - 6B色谱，将佝偻病骨骺软骨中的碱性磷酸酶纯化至表观均一。该酶的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳显示存在一条对应分子量为80,000的主带。2. N端氨基酸序列测定如下：苯丙氨酸 - 缬氨酸 - 脯氨酸 - 谷氨酸 - 赖氨酸5 - 谷氨酸 - 赖氨酸 - 天冬氨酸 - 脯氨酸 - 丝氨酸10 - 酪氨酸 - 色氨酸 - 精氨酸 - 谷氨酰胺 - + ++谷氨酰胺15 - 丙氨酸 - 谷氨酰胺 - 谷氨酸 - 苏氨酸 - 亮氨酸20 - 赖氨酸 - 天冬酰胺 - 丙氨酸 - 亮氨酸 - 赖氨酸25 - 亮氨酸 - 谷氨酰胺 - 赖氨酸 -? - 天冬酰胺 - 缬氨酸 - 天冬酰胺 -? - 丙氨酸 - 赖氨酸35 -? - 异亮氨酸 -? - 甲硫氨酸 - 苯丙氨酸40 - 亮氨酸 - (甘氨酸?) - 天冬氨酸 - (丙氨酸/甘氨酸?) - 甲硫氨酸45 -? - 缬氨酸 -? - (缬氨酸/甘氨酸?) 。