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免疫印迹法检测细胞外 DNA 中 UVB 光产物的方案。

Protocol for immunodot blot detection of UVB photoproducts in extracellular DNA.

机构信息

Department of Pharmacology & Toxicology, Wright State University Boonshoft School of Medicine, Dayton, OH 45435, USA.

Department of Pharmacology & Toxicology, Wright State University Boonshoft School of Medicine, Dayton, OH 45435, USA.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Mar 15;5(1):102838. doi: 10.1016/j.xpro.2024.102838. Epub 2024 Jan 19.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.102838
PMID:38244199
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC10835299/
Abstract

UV radiation induces the formation of adducts in genomic DNA within cells that are later found to be present in cell-free fractions associated with extracellular vesicles (EVs) outside of cells. Here, we present a protocol for isolating UV photoproducts in extracellular DNA released from UVB-irradiated cells via differential centrifugation. We then detail steps for monitoring the DNA adducts using DNA immunoblotting. This protocol can be applied for detection of DNA adducts in EVs from cell culture and skin explant models. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Carpenter et al..

摘要

紫外线辐射会在细胞内的基因组 DNA 中诱导加合物的形成，这些加合物后来被发现在细胞外囊泡（EVs）相关的细胞外无细胞成分中存在。在这里，我们提供了一种通过差速离心从 UVB 照射的细胞中分离细胞外 DNA 中紫外线光产物的方案。然后，我们详细介绍了使用 DNA 免疫印迹监测 DNA 加合物的步骤。该方案可用于检测细胞培养和皮肤外植体模型中 EVs 的 DNA 加合物。有关此方案的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Carpenter 等人的研究。

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