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CRISPR-Cas12a 基因组编辑人多能干细胞蛋白酪氨酸磷酸酶及功能性β样细胞生成的方案。

Protocol for CRISPR-Cas12a genome editing of protein tyrosine phosphatases in human pluripotent stem cells and functional β-like cell generation.

机构信息

Signal Transduction and Metabolism Laboratory, Université libre de Bruxelles, Anderlecht, 1070 Brussels-Capital Region, Belgium.

Signal Transduction and Metabolism Laboratory, Université libre de Bruxelles, Anderlecht, 1070 Brussels-Capital Region, Belgium.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Sep 20;5(3):103297. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103297. Epub 2024 Sep 6.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103297
PMID:39243376
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11409021/
Abstract

Gene editing of human pluripotent stem cells is a promising approach for developing targeted gene therapies for metabolic diseases. Here, we present a protocol for generating a CRISPR-Cas12a gene knockout of protein tyrosine phosphatases in human embryonic stem cells. We describe steps for differentiating the edited clones into pancreatic islet-like spheroids rich in β-like cells. We then detail procedures for implanting these spheroids under the murine kidney capsule for in vivo maturation.

摘要

基因编辑人类多能干细胞是开发代谢疾病靶向基因治疗的一种很有前途的方法。在这里，我们提供了一种在人类胚胎干细胞中生成 CRISPR-Cas12a 基因敲除蛋白酪氨酸磷酸酶的方案。我们描述了将编辑后的克隆分化为富含β样细胞的胰岛样球体的步骤。然后，我们详细介绍了将这些球体植入小鼠肾囊下进行体内成熟的程序。

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