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使用基于细胞的筛选来鉴定适合生物降解剂的E3连接酶的方案。

Protocol to identify E3 ligases amenable to biodegraders using a cell-based screening.

作者信息

Sorbara Marie, Cristol Margot, Cornebois Anaïs, Desrumeaux Klervi, Cordelier Pierre, Bery Nicolas

机构信息

Université de Toulouse, Inserm, CNRS, Université Toulouse III-Paul Sabatier, Centre de Recherches en Cancérologie de Toulouse, 31100 Toulouse, France.

Université de Toulouse, Inserm, CNRS, Université Toulouse III-Paul Sabatier, Centre de Recherches en Cancérologie de Toulouse, 31100 Toulouse, France; Sanofi, Large Molecule Research, 94400 Vitry-sur-Seine, France.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Dec 20;5(4):103413. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103413. Epub 2024 Oct 24.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103413
PMID:39453816
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11541768/
Abstract

Here, we provide a protocol for the identification of E3 ubiquitin ligases that are functional when implemented as biodegraders using a cell-based screening assay. We describe steps for establishing a stable cell line expressing a GFP-tagged protein of interest (POI), preparing a sub-library of E3 ligases to screen, and performing the cell-based screening. This protocol can be broadly applied to identify any functional E3 ligase in a biodegrader setting. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Cornebois et al..

摘要

在此，我们提供了一种用于鉴定E3泛素连接酶的方案，这些连接酶在作为生物降解剂实施时，通过基于细胞的筛选试验发挥功能。我们描述了建立表达感兴趣的绿色荧光蛋白（GFP）标记蛋白（POI）的稳定细胞系、制备用于筛选的E3连接酶亚文库以及进行基于细胞的筛选的步骤。该方案可广泛应用于在生物降解剂环境中鉴定任何功能性E3连接酶。有关该方案使用和执行的完整详细信息，请参考科尔内布瓦等人的研究。

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