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通过逆转录病毒将短发夹RNA导入人自然杀伤细胞样细胞系。

Introduction of shRNAs into human NK-like cell lines with retrovirus.

作者信息

Purdy Amanda K, Campbell Kerry S

机构信息

Institute for Cancer Research, Fox Chase Cancer Center, Philadelphia, PA, USA.

出版信息

Methods Mol Biol. 2010;612:223-31. doi: 10.1007/978-1-60761-362-6_15.

DOI:10.1007/978-1-60761-362-6_15
PMID:20033644
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC2798137/
Abstract

Natural killer (NK) cell lines are difficult to transfect using standard techniques, which limits the ability to establish long-term knockdown of proteins with short-hairpin (sh)RNAs. We have developed a method to stably knockdown protein expression in human NK-like lines by introducing shRNAs in retroviral vectors. After a single transduction with retrovirus, shRNA-containing cells can be selected with drug treatment or sorted for enhanced green fluorescent protein (EGFP) expression. With this method, protein expression can be stably decreased to less than 10% of wild-type levels.

摘要

自然杀伤（NK）细胞系难以使用标准技术进行转染，这限制了利用短发夹（sh）RNA建立蛋白质长期敲低的能力。我们开发了一种方法，通过在逆转录病毒载体中引入shRNA来稳定敲低人NK样细胞系中的蛋白质表达。用逆转录病毒进行单次转导后，可通过药物处理选择含shRNA的细胞，或对增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达进行分选。通过这种方法，蛋白质表达可稳定降低至野生型水平的10%以下。