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用于构建 RNA-蛋白质设备的方案，用于在哺乳动物细胞中对合成 mRNA 进行光化学翻译调控。

A protocol to construct RNA-protein devices for photochemical translational regulation of synthetic mRNAs in mammalian cells.

机构信息

Department of Life Science Frontiers, Center for iPS Cell Research and Application, Kyoto University, 53 Kawahara-cho, Shogoin, Sakyo-ku, Kyoto 606-8507, Japan.

Department of Biofunction Research, Institute of Biomaterials and Bioengineering, Tokyo Medical and Dental University (TMDU), 2-3-10 Kanda-Surugadai, Chiyoda-ku, Tokyo 101-0062, Japan.

出版信息

STAR Protoc. 2022 Jun 10;3(2):101451. doi: 10.1016/j.xpro.2022.101451. eCollection 2022 Jun 17.

DOI:10.1016/j.xpro.2022.101451
PMID:35707682
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9189627/
Abstract

Here, we describe a protocol for the translational regulation of transfected messenger RNAs (mRNAs) using light in mammalian cells. We detail the steps for photocaged ligand synthesis, template DNA preparation, and mRNA synthesis. We describe steps for mRNA transfection, treatment of cells with a photocaged ligand followed by light irradiation, and analysis of the transgene expression. The protocol enables spatiotemporally regulated transgene expression without the risk of insertional mutagenesis. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Nakanishi et al. (2021).

摘要

在这里，我们描述了一种在哺乳动物细胞中用光调控转染信使 RNA（mRNA）翻译的方案。我们详细介绍了光笼化配体合成、模板 DNA 制备和 mRNA 合成的步骤。我们还描述了 mRNA 转染、用光笼化配体处理细胞以及分析转基因表达的步骤。该方案可实现无插入突变风险的转基因表达的时空调控。如需详细了解本方案的使用和执行，请参阅 Nakanishi 等人（2021 年）的文献。

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