• 文献检索
  • 文档翻译
  • 深度研究
  • 学术资讯
  • Suppr Zotero 插件Zotero 插件
  • 邀请有礼
  • 套餐&价格
  • 历史记录
应用&插件
Suppr Zotero 插件Zotero 插件浏览器插件Mac 客户端Windows 客户端微信小程序
定价
高级版会员购买积分包购买API积分包
服务
文献检索文档翻译深度研究API 文档MCP 服务
关于我们
关于 Suppr公司介绍联系我们用户协议隐私条款
关注我们

Suppr 超能文献

核心技术专利：CN118964589B侵权必究
粤ICP备2023148730 号-1Suppr @ 2026

文献检索

告别复杂PubMed语法，用中文像聊天一样搜索，搜遍4000万医学文献。AI智能推荐，让科研检索更轻松。

立即免费搜索

文件翻译

保留排版，准确专业，支持PDF/Word/PPT等文件格式，支持 12+语言互译。

免费翻译文档

深度研究

AI帮你快速写综述，25分钟生成高质量综述，智能提取关键信息，辅助科研写作。

立即免费体验

用于功能测定的 VDAC1 的生产和复性方案。

Protocol for the production and reconstitution of VDAC1 for functional assays.

机构信息

Department of Biochemistry, Weill Cornell Medical College, New York, NY 10065, USA.

Laboratoire d'Ingénierie des Systèmes Macromoléculaires, CNRS - Aix Marseille Université, 31 Chemin Joseph Aiguier, 13402 Marseille, France.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Sep 20;5(3):103240. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103240. Epub 2024 Aug 9.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103240
PMID:39116198
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11383923/
Abstract

The voltage-dependent anion channel (VDAC) is an abundant and multifunctional outer mitochondrial membrane protein, playing key roles in neurodegeneration, apoptosis, and mitochondrial membrane biogenesis. Here, we present a protocol to produce and reconstitute high yields of detergent-solubilized VDAC, expressed as inclusion bodies in E. coli. We describe steps for purification by affinity chromatography and refolding in lauryldimethylamine-N-oxide (LDAO). We then detail procedures for reconstituting VDAC into membrane vesicles to assay its channel and phospholipid scramblase activity via fluorescence-based assays. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Bergdoll et al., Queralt-Martín et al., and Jahn et al..

摘要

电压依赖性阴离子通道（VDAC）是一种丰富且多功能的线粒体膜蛋白，在神经退行性变、细胞凋亡和线粒体膜生物发生中发挥关键作用。在这里，我们提供了一个生产和重组成纤维菌表达的包涵体形式的 VDAC 的方案，该蛋白在去污剂中具有高产量可溶性。我们描述了通过亲和层析进行纯化和在月桂基二甲基氧化胺（LDAO）中进行复性的步骤。然后，我们详细介绍了将 VDAC 重新组装到膜泡中以通过荧光测定法测定其通道和磷脂翻转酶活性的程序。有关此方案的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Bergdoll 等人、Queralt-Martín 等人和 Jahn 等人的研究。

https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/d66be3c0135d/gr10.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/3041492c392f/fx1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/ebd56253d983/gr1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/9741fa45a06b/gr3.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/513c0b6c4231/gr2.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/5689eacd7fdc/gr4.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/7a399fc6a052/gr5.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/dab72e2c8574/gr6.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/1d776b90c4e9/gr7.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/703d76e10b71/gr8.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/79b92f295a95/gr9.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/d66be3c0135d/gr10.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/3041492c392f/fx1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/ebd56253d983/gr1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/9741fa45a06b/gr3.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/513c0b6c4231/gr2.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/5689eacd7fdc/gr4.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/7a399fc6a052/gr5.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/dab72e2c8574/gr6.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/1d776b90c4e9/gr7.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/703d76e10b71/gr8.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/79b92f295a95/gr9.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c947/11383923/d66be3c0135d/gr10.jpg

相似文献

1
Protocol for the production and reconstitution of VDAC1 for functional assays.用于功能测定的 VDAC1 的生产和复性方案。
STAR Protoc. 2024 Sep 20;5(3):103240. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103240. Epub 2024 Aug 9.
2
Protocol for high-yield bacterial expression and purification of the voltage-dependent anion channel 1 for high-throughput biophysical assays.用于高通量生物物理分析的电压依赖性阴离子通道1的高产细菌表达与纯化方案。
STAR Protoc. 2025 Mar 21;6(1):103557. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103557. Epub 2025 Jan 11.
3
Conservation of the oligomeric state of native VDAC1 in detergent micelles.天然VDAC1在去污剂胶束中的寡聚状态的保守性。
Biochimie. 2016 Aug;127:163-72. doi: 10.1016/j.biochi.2016.05.015. Epub 2016 May 27.
4
Phospholipids are imported into mitochondria by VDAC, a dimeric beta barrel scramblase.磷脂通过 VDAC（一种二聚体β桶结构的翻转酶）被导入线粒体。
Nat Commun. 2023 Dec 8;14(1):8115. doi: 10.1038/s41467-023-43570-y.
5
NMR Spectroscopic Studies of Ion Channels in Lipid Bilayers: Sample Preparation Strategies Exemplified by the Voltage Dependent Anion Channel.NMR 光谱学在脂双层离子通道中的研究：以电压门控阴离子通道为例的样品制备策略。
Methods Mol Biol. 2021;2302:201-217. doi: 10.1007/978-1-0716-1394-8_11.
6
Structure of the human voltage-dependent anion channel.人类电压依赖性阴离子通道的结构。
Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Oct 7;105(40):15370-5. doi: 10.1073/pnas.0808115105. Epub 2008 Oct 1.
7
The mitochondrial voltage-dependent anion channel 1 in tumor cells.肿瘤细胞中的线粒体电压依赖性阴离子通道1
Biochim Biophys Acta. 2015 Oct;1848(10 Pt B):2547-75. doi: 10.1016/j.bbamem.2014.10.040. Epub 2014 Nov 4.
8
Crystal structural characterization reveals novel oligomeric interactions of human voltage-dependent anion channel 1.晶体结构表征揭示了人类电压依赖性阴离子通道1的新型寡聚相互作用。
Protein Sci. 2017 Sep;26(9):1749-1758. doi: 10.1002/pro.3211. Epub 2017 Jun 21.
9
The voltage-dependent anion selective channel 1 (VDAC1) topography in the mitochondrial outer membrane as detected in intact cell.电压依赖性阴离子选择性通道 1（VDAC1）在外膜中的拓扑结构在完整细胞中检测到。
PLoS One. 2013 Dec 6;8(12):e81522. doi: 10.1371/journal.pone.0081522. eCollection 2013.
10
Backbone and ILV side chain methyl group assignments of the integral human membrane protein VDAC-1.人源整合膜蛋白VDAC-1的主链及内腔侧链甲基基团归属
Biomol NMR Assign. 2010 Apr;4(1):29-32. doi: 10.1007/s12104-009-9194-0. Epub 2009 Nov 22.

引用本文的文献

1
Opsins are Phospholipid Scramblases in All Domains of Life.视蛋白是所有生命域中的磷脂翻转酶。
bioRxiv. 2025 Aug 18:2025.08.17.670764. doi: 10.1101/2025.08.17.670764.
2
A Membrane-Disruptive Action of VBIT-4 Challenges Its Role as a Widely Used VDAC Oligomerization Inhibitor.VBIT-4的膜破坏作用对其作为广泛使用的电压依赖性阴离子通道寡聚化抑制剂的作用提出了挑战。
bioRxiv. 2025 Jul 3:2025.06.30.661942. doi: 10.1101/2025.06.30.661942.
3
Membrane lipid composition modulates the organization of VDAC1, a mitochondrial gatekeeper.膜脂组成调节线粒体守门蛋白VDAC1的组织。
Commun Biol. 2025 Jun 17;8(1):936. doi: 10.1038/s42003-025-08311-5.
4
Protocol for high-yield bacterial expression and purification of the voltage-dependent anion channel 1 for high-throughput biophysical assays.用于高通量生物物理分析的电压依赖性阴离子通道1的高产细菌表达与纯化方案。
STAR Protoc. 2025 Mar 21;6(1):103557. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103557. Epub 2025 Jan 11.