• 文献检索
  • 文档翻译
  • 深度研究
  • 学术资讯
  • Suppr Zotero 插件Zotero 插件
  • 邀请有礼
  • 套餐&价格
  • 历史记录
应用&插件
Suppr Zotero 插件Zotero 插件浏览器插件Mac 客户端Windows 客户端微信小程序
定价
高级版会员购买积分包购买API积分包
服务
文献检索文档翻译深度研究API 文档MCP 服务
关于我们
关于 Suppr公司介绍联系我们用户协议隐私条款
关注我们

Suppr 超能文献

核心技术专利：CN118964589B侵权必究
粤ICP备2023148730 号-1Suppr @ 2026

文献检索

告别复杂PubMed语法，用中文像聊天一样搜索，搜遍4000万医学文献。AI智能推荐，让科研检索更轻松。

立即免费搜索

文件翻译

保留排版，准确专业，支持PDF/Word/PPT等文件格式，支持 12+语言互译。

免费翻译文档

深度研究

AI帮你快速写综述，25分钟生成高质量综述，智能提取关键信息，辅助科研写作。

立即免费体验

体外重建特定位点磷酸化 RNA 聚合酶 II 的方案，以鉴定新型转录调控因子的募集。

Protocol for the in vitro reconstruction of site-specifically phosphorylated RNA Pol II to identify the recruitment of novel transcription regulators.

机构信息

Department of Molecular Biosciences, University of Texas, Austin, TX 78712, USA.

Department of Molecular Biosciences, University of Texas, Austin, TX 78712, USA.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Sep 20;5(3):103277. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103277. Epub 2024 Aug 27.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103277
PMID:39196783
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11400965/
Abstract

The repetitive C-terminal domain (CTD) of the largest subunit of RNA polymerase II (RNAPII) becomes differentially phosphorylated throughout the transcription cycle. Here, we present a protocol to site-specifically phosphorylate the CTD of RNAPII by leveraging the specificity of well-characterized CTD kinases. We describe the steps for optimal phosphorylation of the CTD and the preparation of nuclear protein extract. This protocol can be used to identify the interactome of a phospho-CTD and has the potential to identify novel RNAPII-binding proteins. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Moreno et al..

摘要

RNA 聚合酶 II（RNAPII）大亚基的重复 C 端结构域（CTD）在整个转录循环中会发生不同的磷酸化。在此，我们提供了一种利用经过充分研究的 CTD 激酶的特异性来对 RNAPII 的 CTD 进行定点磷酸化的方案。我们描述了优化 CTD 磷酸化的步骤以及核蛋白提取物的制备。该方案可用于鉴定磷酸化 CTD 的相互作用组，并有可能鉴定新的 RNAPII 结合蛋白。有关该方案的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Moreno 等人的文章。

https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/060fbc34e895/gr5.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/0f53d7b51016/fx1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/b219bdce3078/gr1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/3e69168d03cf/gr2.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/54de83d74447/gr3.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/6341acd297a8/gr4.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/060fbc34e895/gr5.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/0f53d7b51016/fx1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/b219bdce3078/gr1.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/3e69168d03cf/gr2.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/54de83d74447/gr3.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/6341acd297a8/gr4.jpg
https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/c0c9/11400965/060fbc34e895/gr5.jpg

相似文献

1
Protocol for the in vitro reconstruction of site-specifically phosphorylated RNA Pol II to identify the recruitment of novel transcription regulators.体外重建特定位点磷酸化 RNA 聚合酶 II 的方案，以鉴定新型转录调控因子的募集。
STAR Protoc. 2024 Sep 20;5(3):103277. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103277. Epub 2024 Aug 27.
2
Proteomics studies of the interactome of RNA polymerase II C-terminal repeated domain.RNA聚合酶II C末端重复结构域相互作用组的蛋白质组学研究。
BMC Res Notes. 2015 Oct 29;8:616. doi: 10.1186/s13104-015-1569-y.
3
The Ser7 of RNA Pol II-CTD influences the recruitment of Cdc73 for mRNA transcription.RNA 聚合酶 II-CTD 的 Ser7 影响 Cdc73 的募集用于 mRNA 转录。
Int J Biol Macromol. 2024 Jan;254(Pt 2):127881. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2023.127881. Epub 2023 Nov 8.
4
Different phosphoisoforms of RNA polymerase II engage the Rtt103 termination factor in a structurally analogous manner.不同磷酸化形式的 RNA 聚合酶 II 以结构类似的方式与 Rtt103 终止因子结合。
Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 May 16;114(20):E3944-E3953. doi: 10.1073/pnas.1700128114. Epub 2017 May 2.
5
Dynamic phosphorylation patterns of RNA polymerase II CTD during transcription.转录过程中RNA聚合酶II CTD的动态磷酸化模式。
Biochim Biophys Acta. 2013 Jan;1829(1):55-62. doi: 10.1016/j.bbagrm.2012.08.013. Epub 2012 Sep 7.
6
Structural insight into recognition of phosphorylated threonine-4 of RNA polymerase II C-terminal domain by Rtt103p.Rtt103p对RNA聚合酶II C末端结构域磷酸化苏氨酸-4识别的结构洞察。
EMBO Rep. 2017 Jun;18(6):906-913. doi: 10.15252/embr.201643723. Epub 2017 May 2.
7
HIV-1 Tat interaction with RNA polymerase II C-terminal domain (CTD) and a dynamic association with CDK2 induce CTD phosphorylation and transcription from HIV-1 promoter.HIV-1反式激活因子（Tat）与RNA聚合酶II羧基末端结构域（CTD）相互作用，并与细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）动态结合，从而诱导CTD磷酸化及HIV-1启动子转录。
J Biol Chem. 2002 Sep 13;277(37):33922-9. doi: 10.1074/jbc.M111349200. Epub 2002 Jul 11.
8
CDKF;1 and CDKD protein kinases regulate phosphorylation of serine residues in the C-terminal domain of Arabidopsis RNA polymerase II.CDKF;1 和 CDKD 蛋白激酶调节拟南芥 RNA 聚合酶 II C 末端结构域丝氨酸残基的磷酸化。
Plant Cell. 2012 Apr;24(4):1626-42. doi: 10.1105/tpc.112.096834. Epub 2012 Apr 30.
9
Phosphorylation of the carboxy-terminal repeat domain in RNA polymerase II by cyclin-dependent kinases is sufficient to inhibit transcription.细胞周期蛋白依赖性激酶对RNA聚合酶II羧基末端重复结构域的磷酸化足以抑制转录。
J Cell Biochem. 1997 Mar 1;64(3):390-402.
10
The code and beyond: transcription regulation by the RNA polymerase II carboxy-terminal domain.代码之外：RNA 聚合酶 II 羧基末端结构域的转录调控。
Nat Rev Mol Cell Biol. 2017 Apr;18(4):263-273. doi: 10.1038/nrm.2017.10. Epub 2017 Mar 1.

引用本文的文献

1
RPRD1B's direct interaction with phosphorylated RNA polymerase II regulates polyadenylation of cell cycle genes and drives cancer progression.RPRD1B与磷酸化的RNA聚合酶II的直接相互作用调节细胞周期基因的聚腺苷酸化并推动癌症进展。
RSC Chem Biol. 2025 Jan 22;6(3):423-437. doi: 10.1039/d4cb00212a. eCollection 2025 Mar 5.