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[利用鸟苷三磷酸类似物对噬菌体T7 DNA依赖性RNA聚合酶的研究。亲和修饰以及使用荧光标记物对与基质相互作用的研究]

[Study of phage T7 DNA-dependent RNA-polymerase using GTP analogs. Affinity modification and study of interaction with matrices using fluorescent markers].

作者信息

Mishin A A, Khropov Iu V, Tunitskaia V L, Kochetkov S N

出版信息

Biokhimiia. 1993 Jan;58(1):43-9.

PMID:8471665
Abstract

Interactions of the bacteriophage T7 DNA-dependent RNA polymerase with three GTP analogs have been studied. All of the three analogs tested contained substituted naphthalenesulphamide groups and were shown to be under appropriate conditions irreversible covalent inhibitors of the enzyme, the modified enzyme possessing fluorescent properties. One of these analogs contained the reactive 2-bromoethyl phosphonate group and was shown to cause the loss of the enzyme affinity for polynucleotide templates. The other two modifiers which contained the azide reactive group did not alter the enzyme-template affinity, the polynucleotide binding leading to a notable increase of the enzyme fluorescence intensity. The latter two modifiers are supposed to be convenient for fluorescent labelling of the active site of RNA polymerase for enzyme-template binding studies.

摘要

对噬菌体T7 DNA依赖性RNA聚合酶与三种鸟苷三磷酸(GTP)类似物的相互作用进行了研究。所测试的三种类似物均含有取代的萘磺酰胺基团,并且在适当条件下被证明是该酶的不可逆共价抑制剂,修饰后的酶具有荧光特性。其中一种类似物含有反应性的2-溴乙基膦酸酯基团,被证明会导致该酶对多核苷酸模板的亲和力丧失。另外两种含有叠氮化物反应基团的修饰剂不会改变酶与模板的亲和力,多核苷酸结合会导致酶荧光强度显著增加。后两种修饰剂被认为便于对RNA聚合酶的活性位点进行荧光标记,用于酶与模板结合的研究。

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