肌球蛋白亚片段1与双马来酰胺的分子内交联

Intramolecular cross-linking of myosin subfragment 1 with bimane.

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Ue K

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Biochemistry. 1987 Apr 7;26(7):1889-94. doi: 10.1021/bi00381a016.

Abstract

We previously showed that the fluorescent inter-thiol cross-linker dibromobimane (DBB) [Kosower, N. S., Kosower, E. M., Newton, G. L., & Ranney, H. M. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 76, 3382-3386] cross-links two [50 and 20 kilodaltons (kDa)] of the three major fragments of myosin subfragment 1 (S-1); on intact S-1, DBB quenches tryptophans and inhibits all ATPases [Mornet, D., Ue, K., & Morales, M. F. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 1658-1662]. Here we characterize the modification chemically: DBB cross-links Cys-522 (50 kDa) with Cys-707 (20 kDa), thereby sealing a large preexisting heavy-chain loop containing important functionalities. Cross-linking rate is insensitive to nucleotides, but apparently sterically, either monobromobimane or DBB reduces Ca2+-ATPase to low, nonzero levels.

摘要

我们之前表明，荧光性的硫醇间交联剂二溴联亚胺（DBB）[科索韦尔，N.S.，科索韦尔，E.M.，牛顿，G.L.，& 兰尼，H.M.（1979年）《美国国家科学院院刊》76，3382 - 3386] 使肌球蛋白亚片段1（S - 1）的三个主要片段中的两个[50和20千道尔顿（kDa）]发生交联；在完整的S - 1上，DBB淬灭色氨酸并抑制所有ATP酶[莫尔内，D.，上，K.，& 莫拉莱斯，M.F.（1985年）《美国国家科学院院刊》82，1658 - 1662]。在此我们对该修饰进行化学表征：DBB使半胱氨酸 - 522（50 kDa）与半胱氨酸 - 707（20 kDa）交联，从而封闭一个预先存在的包含重要功能基团的大重链环。交联速率对核苷酸不敏感，但显然从空间角度来看，单溴联亚胺或DBB都会将Ca²⁺ - ATP酶活性降低到低的非零水平。