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使用荧光杂交和双报告基因系统在培养细胞中成像和定量分析核质转运的方案。

Protocol to image and quantify nucleocytoplasmic transport in cultured cells using fluorescent hybridization and a dual reporter system.

机构信息

Department of Biochemistry and Molecular Biology, Louisiana State University Health Sciences Center, Shreveport, LA 71130-3932, USA.

Department of Biochemistry and Molecular Biology, Louisiana State University Health Sciences Center, Shreveport, LA 71130-3932, USA.

出版信息

STAR Protoc. 2022 Nov 3;3(4):101813. doi: 10.1016/j.xpro.2022.101813. eCollection 2022 Dec 16.

DOI:10.1016/j.xpro.2022.101813
PMID:36386872
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9641092/
Abstract

Nucleocytoplasmic transport (NCT) plays critical roles in maintaining cellular homeostasis. Here, we present a protocol to measure NCT for both transcript and protein cargos in cultured cells. We first describe the fluorescent hybridization (FISH) assay to measure the nuclear mRNA export. We then detail a dual reporter system to measure the protein NCT. This protocol also includes image analysis and data output using CellProfiler™. The combined approach can be used to unbiasedly analyze NCT activities in cultured cells. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Ding et al. (2020, 2021).

摘要

核质转运 (NCT) 在维持细胞内稳态中起着至关重要的作用。在这里，我们提供了一种在培养细胞中测量转录物和蛋白质货物的 NCT 的方案。我们首先描述了荧光杂交 (FISH) 测定法来测量核 mRNA 输出。然后，我们详细介绍了一种双重报告基因系统来测量蛋白质 NCT。该方案还包括使用 CellProfiler™进行图像分析和数据输出。该组合方法可用于无偏地分析培养细胞中的 NCT 活性。有关此方案的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Ding 等人（2020 年，2021 年）。

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