• 文献检索
  • 文档翻译
  • 深度研究
  • 学术资讯
  • Suppr Zotero 插件Zotero 插件
  • 邀请有礼
  • 套餐&价格
  • 历史记录
应用&插件
Suppr Zotero 插件Zotero 插件浏览器插件Mac 客户端Windows 客户端微信小程序
定价
高级版会员购买积分包购买API积分包
服务
文献检索文档翻译深度研究API 文档MCP 服务
关于我们
关于 Suppr公司介绍联系我们用户协议隐私条款
关注我们

Suppr 超能文献

核心技术专利：CN118964589B侵权必究
粤ICP备2023148730 号-1Suppr @ 2026

文献检索

告别复杂PubMed语法，用中文像聊天一样搜索，搜遍4000万医学文献。AI智能推荐，让科研检索更轻松。

立即免费搜索

文件翻译

保留排版，准确专业，支持PDF/Word/PPT等文件格式，支持 12+语言互译。

免费翻译文档

深度研究

AI帮你快速写综述，25分钟生成高质量综述，智能提取关键信息，辅助科研写作。

立即免费体验

离子对反相高效液相色谱法分析 KRAS 的鸟嘌呤核苷酸结合状态。

Analysis of the Guanine Nucleotide-Bound State of KRAS by Ion-Pair Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography.

机构信息

Department of Biochemistry, Meiji Pharmaceutical University, Tokyo, Japan.

出版信息

Methods Mol Biol. 2024;2797:227-236. doi: 10.1007/978-1-0716-3822-4_16.

DOI:10.1007/978-1-0716-3822-4_16
PMID:38570463
Abstract

Guanine nucleotides can be quantitatively analyzed by high-performance liquid chromatography (HPLC). Here we describe an ion-pair reversed-phase HPLC (IP-RP-HPLC)-based method, which enables analyzing GDP and GTP bound to small GTPases immunoprecipitated from cells. The activation status of FLAG-KRAS expressed in HEK293T cells can be investigated with the IP-RP-HPLC method. This method also can be adapted to determine the effects of compounds such as the KRAS/G12C inhibitor sotorasib on the activation status of FLAG-KRAS in the cells.

摘要

嘌呤核苷酸可以通过高效液相色谱法（HPLC）进行定量分析。在这里，我们描述了一种基于离子对反相高效液相色谱法（IP-RP-HPLC）的方法，该方法可以分析从小鼠细胞中免疫沉淀的小 GTPase 结合的 GDP 和 GTP。可以使用 IP-RP-HPLC 方法研究表达在 HEK293T 细胞中的 FLAG-KRAS 的激活状态。该方法还可以适用于确定 KRAS/G12C 抑制剂索托拉西布等化合物对细胞中 FLAG-KRAS 激活状态的影响。

相似文献

1
Analysis of the Guanine Nucleotide-Bound State of KRAS by Ion-Pair Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography.离子对反相高效液相色谱法分析 KRAS 的鸟嘌呤核苷酸结合状态。
Methods Mol Biol. 2024;2797:227-236. doi: 10.1007/978-1-0716-3822-4_16.
2
Conformational resolution of nucleotide cycling and effector interactions for multiple small GTPases determined in parallel.多种小分子 GTP 酶核苷酸循环和效应物相互作用构象解析的平行测定。
J Biol Chem. 2019 Jun 21;294(25):9937-9948. doi: 10.1074/jbc.RA119.008653. Epub 2019 May 14.
3
KRAS Inhibitor Resistance in -Amplified Non-Small Cell Lung Cancer Induced By RAS- and Non-RAS-Mediated Cell Signaling Mechanisms.KRAS 抑制剂耐药性在 -扩增非小细胞肺癌中由 RAS 和非 RAS 介导的细胞信号转导机制诱导。
Clin Cancer Res. 2021 Oct 15;27(20):5697-5707. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-21-0856. Epub 2021 Aug 7.
4
[Pharmacological characteristics and clinical study results of the first RAS inhibitor sotorasib (LUMAKRAS) for non-small cell lung cancer with KRAS G12C mutation].首个用于KRAS G12C突变非小细胞肺癌的RAS抑制剂索托拉西布（LUMAKRAS）的药理学特性及临床研究结果
Nihon Yakurigaku Zasshi. 2023;158(5):391-398. doi: 10.1254/fpj.22148.
5
Development of a versatile HPLC-based method to evaluate the activation status of small GTPases.开发一种基于 HPLC 的通用方法来评估小 GTPase 的激活状态。
J Biol Chem. 2021 Dec;297(6):101428. doi: 10.1016/j.jbc.2021.101428. Epub 2021 Nov 19.
6
Simultaneous determination of guanine nucleotides in rat brain by high-performance liquid chromatography with dual-electrochemical detection.高效液相色谱-双电化学检测法同时测定大鼠脑中鸟嘌呤核苷酸
Anal Biochem. 1984 Nov 1;142(2):395-9. doi: 10.1016/0003-2697(84)90482-2.
7
HPLC method to resolve, identify and quantify guanine nucleotides bound to recombinant ras GTPase.高效液相色谱法解析、鉴定和定量重组 ras GTPase 结合的鸟嘌呤核苷酸。
Anal Biochem. 2021 Oct 15;631:114338. doi: 10.1016/j.ab.2021.114338. Epub 2021 Aug 22.
8
Mechanism of free radical nitric oxide-mediated Ras guanine nucleotide dissociation.自由基一氧化氮介导的Ras鸟嘌呤核苷酸解离机制。
J Mol Biol. 2005 Mar 11;346(5):1423-40. doi: 10.1016/j.jmb.2004.12.050. Epub 2005 Jan 12.
9
Purine metabolite and energy charge analysis of Trypanosoma brucei cells in different growth phases using an optimized ion-pair RP-HPLC/UV for the quantification of adenine and guanine pools.使用优化的离子对反相高效液相色谱/紫外检测法对不同生长阶段的布氏锥虫细胞进行嘌呤代谢物和能荷分析，以定量腺嘌呤和鸟嘌呤库。
Exp Parasitol. 2014 Jun;141:28-38. doi: 10.1016/j.exppara.2014.03.006. Epub 2014 Mar 19.
10
Pharmacophoric analogs of sotorasib-entrapped KRAS G12C in its inactive GDP-bound conformation: covalent docking and molecular dynamics investigations.索托拉西布结合的 KRAS G12C 处于无活性 GDP 结合构象的药效团类似物：共价对接和分子动力学研究。
Mol Divers. 2023 Aug;27(4):1795-1807. doi: 10.1007/s11030-022-10534-1. Epub 2022 Oct 21.

引用本文的文献

1
Quantifying small GTPase activation status using a novel fluorescence HPLC-based assay.使用基于高效液相色谱的新型荧光检测法对小GTP酶激活状态进行定量分析。
J Biol Chem. 2025 Apr 24;301(6):108545. doi: 10.1016/j.jbc.2025.108545.
2
Various methods to detect small GTPase activation: from radioisotope-based methods to the Small GTPase ActIvitY ANalysing (SAIYAN) system.检测小GTP酶激活的各种方法：从基于放射性同位素的方法到小GTP酶活性分析（SAIYAN）系统。
J Biochem. 2025 Apr 29;177(5):321-327. doi: 10.1093/jb/mvaf012.

本文引用的文献

1
Development of a versatile HPLC-based method to evaluate the activation status of small GTPases.开发一种基于 HPLC 的通用方法来评估小 GTPase 的激活状态。
J Biol Chem. 2021 Dec;297(6):101428. doi: 10.1016/j.jbc.2021.101428. Epub 2021 Nov 19.
2
HPLC method to resolve, identify and quantify guanine nucleotides bound to recombinant ras GTPase.高效液相色谱法解析、鉴定和定量重组 ras GTPase 结合的鸟嘌呤核苷酸。
Anal Biochem. 2021 Oct 15;631:114338. doi: 10.1016/j.ab.2021.114338. Epub 2021 Aug 22.
3
Intensiometric biosensors visualize the activity of multiple small GTPases in vivo.
压敏生物传感器可在体内可视化多个小分子 GTPase 的活性。
Nat Commun. 2019 Jan 14;10(1):211. doi: 10.1038/s41467-018-08217-3.
4
A Scalable Genome-Editing-Based Approach for Mapping Multiprotein Complexes in Human Cells.基于可扩展基因组编辑的方法绘制人类细胞中多蛋白复合物图谱。
Cell Rep. 2015 Oct 20;13(3):621-633. doi: 10.1016/j.celrep.2015.09.009. Epub 2015 Oct 8.
5
Regulation of small GTPases by GEFs, GAPs, and GDIs.小分子 GTPases 的调节：GEFs、GAPs 和 GDIs 的作用。
Physiol Rev. 2013 Jan;93(1):269-309. doi: 10.1152/physrev.00003.2012.
6
Ras GTPase activating (RasGAP) activity of the dual specificity GAP protein Rasal requires colocalization and C2 domain binding to lipid membranes.双特异性 GAP 蛋白 Rasal 的 Ras GTPase 激活（RasGAP）活性需要共定位和 C2 结构域与脂膜的结合。
Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Jan 2;110(1):111-6. doi: 10.1073/pnas.1201658110. Epub 2012 Dec 18.
7
Spatiotemporal regulation of small GTPases as revealed by probes based on the principle of Förster Resonance Energy Transfer (FRET): Implications for signaling and pharmacology.基于Förster 共振能量转移（FRET）原理的探针揭示的小分子 GTPases 的时空调节：对信号转导和药理学的影响。
Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2011;51:337-58. doi: 10.1146/annurev-pharmtox-010510-100234.
8
The Rap-RapGAP complex: GTP hydrolysis without catalytic glutamine and arginine residues.Rap-RapGAP复合物：不含催化性谷氨酰胺和精氨酸残基的GTP水解
EMBO J. 2008 Apr 9;27(7):1145-53. doi: 10.1038/emboj.2008.30. Epub 2008 Feb 28.
9
Use of polyethyleneimine polymer in cell culture as attachment factor and lipofection enhancer.聚乙烯亚胺聚合物在细胞培养中作为附着因子和脂质转染增强剂的应用。
BMC Biotechnol. 2004 Oct 15;4:23. doi: 10.1186/1472-6750-4-23.
10
Human RAS superfamily proteins and related GTPases.人类RAS超家族蛋白及相关GTP酶
Sci STKE. 2004 Sep 7;2004(250):RE13. doi: 10.1126/stke.2502004re13.