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通过定点诱变构建的人及非洲爪蟾抑制性tRNA的体内氨基酰化作用。

In vivo aminoacylation of human and Xenopus suppressor tRNAs constructed by site-specific mutagenesis.

作者信息

Ho Y S, Kan Y W

出版信息

Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 Apr;84(8):2185-8. doi: 10.1073/pnas.84.8.2185.

DOI:10.1073/pnas.84.8.2185
PMID:3031670
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC304613/
Abstract

Amber suppressor tRNA genes were constructed by site-specific mutagenesis of the anticodons of human lysine-inserting tRNA (tRNA(Lys)) and glutamine-inserting tRNA (tRNA(Gln)) genes, and a Xenopus laevis tyrosine-inserting tRNA (tRNA(Tyr)) gene. As previous in vitro studies in prokaryotes have shown that substitution of nucleotides in the anticodon region can profoundly affect tRNA aminoacylation, it is important to determine whether the mutation affects aminoacylation of these eukaryotic tRNAs. We present a method for quantitating the tRNA aminoacylation in vivo in mammalian cells, and we have determined that the suppressor tRNA(Tyr) is fully aminoacylated and suppressor tRNA(Lys) and tRNA(Gln) are aminoacylated 40-50% and 80%, respectively. This in vivo method of estimating aminoacylation may be applied to other mutations in the tRNA genes.

摘要

通过对人赖氨酸插入tRNA（tRNA(Lys)）、谷氨酰胺插入tRNA（tRNA(Gln)）基因的反密码子以及非洲爪蟾酪氨酸插入tRNA（tRNA(Tyr)）基因进行位点特异性诱变，构建了琥珀抑制tRNA基因。由于先前在原核生物中的体外研究表明，反密码子区域核苷酸的替换可深刻影响tRNA的氨酰化作用，因此确定该突变是否影响这些真核tRNA的氨酰化作用非常重要。我们提出了一种在哺乳动物细胞中体内定量tRNA氨酰化作用的方法，并且我们已经确定抑制tRNA(Tyr)完全被氨酰化，而抑制tRNA(Lys)和tRNA(Gln)的氨酰化率分别为40% - 50%和80%。这种体内估计氨酰化作用的方法可应用于tRNA基因中的其他突变。

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