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通过在人细胞裂解物中进行分裂荧光素酶互补分析来分析蛋白质-蛋白质相互作用的实验方案。

Protocol for analyzing protein-protein interactions by split-luciferase complementation assays in human cell lysates.

作者信息

Claes Zander, Lemaire Sarah, Bollen Mathieu

机构信息

Laboratory of Biosignaling & Therapeutics, KU Leuven Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Leuven, Leuven, Belgium.

Laboratory of Biosignaling & Therapeutics, KU Leuven Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Leuven, Leuven, Belgium.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Dec 20;5(4):103328. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103328. Epub 2024 Oct 4.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103328
PMID:39369386
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11490698/
Abstract

Here, we present a lysate-based split-luciferase assay for examining protein-protein interactions (PPIs) in HEK293T cell lysates, exemplified by interactions between subunits of protein phosphatase PP1. We describe steps for storing and re-using lysates, sensor design, assay setup/optimization, and high-throughput screening of compound libraries. We then detail procedures for applying the assay as a research tool to characterize the dynamics of PPIs, which we illustrate with specific examples. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Claes and Bollen..

摘要

在此，我们展示了一种基于裂解物的分裂荧光素酶测定法，用于检测HEK293T细胞裂解物中的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI），以蛋白磷酸酶PP1亚基之间的相互作用为例。我们描述了裂解物的储存和再利用步骤、传感器设计、测定设置/优化以及化合物库的高通量筛选。然后，我们详细介绍了将该测定法作为研究工具来表征PPI动态的程序，并通过具体实例进行说明。有关此方案的使用和执行的完整详细信息，请参考Claes和Bollen的文献。

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