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不同类型 SARS-CoV-2 样本的热失活:生物安全、分子检测和血清学诊断的哪些方案?

Heat Inactivation of Different Types of SARS-CoV-2 Samples: What Protocols for Biosafety, Molecular Detection and Serological Diagnostics?

机构信息

Unité des Virus Émergents (UVE: Aix-Marseille Univ-IRD 190-Inserm 1207-IHU Méditerranée Infection), Aix-Marseille University, 13005 Marseille, France.

出版信息

Viruses. 2020 Jul 7;12(7):735. doi: 10.3390/v12070735.

Abstract

Standard precautions to minimize the risk of SARS-CoV-2 transmission implies that infected cell cultures and clinical specimens may undergo some sort of inactivation to reduce or abolish infectivity. We evaluated three heat inactivation protocols (56 °C-30 min, 60 °C-60 min and 92 °C-15 min) on SARS-CoV-2 using (i) infected cell culture supernatant, (ii) virus-spiked human sera (iii) and nasopharyngeal samples according to the recommendations of the European norm NF EN 14476-A2. Regardless of the protocol and the type of samples, a 4 Log TCID50 reduction was observed. However, samples containing viral loads > 6 Log TCID were still infectious after 56 °C-30 min and 60 °C-60 min, although infectivity was < 10 TCID. The protocols 56 °C-30 min and 60 °C-60 min had little influence on the RNA copies detection, whereas 92 °C-15 min drastically reduced the limit of detection, which suggests that this protocol should be avoided for inactivation ahead of molecular diagnostics. Lastly, 56 °C-30 min treatment of serum specimens had a negligible influence on the results of IgG detection using a commercial ELISA test, whereas a drastic decrease in neutralizing titers was observed.

摘要

标准预防措施旨在最大限度地降低 SARS-CoV-2 传播的风险,这意味着受感染的细胞培养物和临床标本可能需要经过某种形式的灭活处理,以降低或消除其感染性。我们根据欧洲标准 NF EN 14476-A2 的建议,用(i)感染的细胞培养上清液、(ii)病毒感染的人血清和(iii)鼻咽样本,评估了三种热灭活方案(56°C-30 分钟、60°C-60 分钟和 92°C-15 分钟)对 SARS-CoV-2 的作用。无论采用哪种方案和样本类型,均可观察到 4 个对数 TCID50 的减少。然而,在 56°C-30 分钟和 60°C-60 分钟的处理后,病毒载量>6 个对数 TCID 的样本仍然具有感染性,尽管感染力<10 TCID。56°C-30 分钟和 60°C-60 分钟的方案对 RNA 拷贝检测的影响较小,而 92°C-15 分钟则大大降低了检测下限,这表明在进行分子诊断之前,应避免使用该方案进行灭活。最后,56°C-30 分钟处理血清标本对使用商业 ELISA 检测 IgG 的结果几乎没有影响,但观察到中和滴度急剧下降。

https://cdn.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/blobs/824b/7412566/f482d8c0cd6a/viruses-12-00735-g001.jpg

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