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ADGRD1/GPR133 和 ADGRG7/GPR128 的 mRNA 表达在 SARS-CoV-2 感染的肺腺癌细胞 Calu-3 中上调。

Upregulation of mRNA Expression of ADGRD1/GPR133 and ADGRG7/GPR128 in SARS-CoV-2-Infected Lung Adenocarcinoma Calu-3 Cells.

机构信息

Institute of Organic Chemistry and Biochemistry of the Czech Academy of Sciences, 166 10 Prague, Czech Republic.

Department of Genetics and Microbiology, Charles University, Faculty of Sciences, 128 44 Prague, Czech Republic.

出版信息

Cells. 2024 May 7;13(10):791. doi: 10.3390/cells13100791.

DOI:10.3390/cells13100791
PMID:38786015
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11119037/
Abstract

Adhesion G protein-coupled receptors (aGPCRs) play an important role in neurodevelopment, immune defence and cancer; however, their role throughout viral infections is mostly unexplored. We have been searching for specific aGPCRs involved in SARS-CoV-2 infection of mammalian cells. In the present study, we infected human epithelial cell lines derived from lung adenocarcinoma (Calu-3) and colorectal carcinoma (Caco-2) with SARS-CoV-2 in order to analyse changes in the level of mRNA encoding individual aGPCRs at 6 and 12 h post infection. Based on significantly altered mRNA levels, we identified four aGPCR candidates-ADGRB3/BAI3, ADGRD1/GPR133, ADGRG7/GPR128 and ADGRV1/GPR98. Of these receptors, ADGRD1/GPR133 and ADGRG7/GPR128 showed the largest increase in mRNA levels in SARS-CoV-2-infected Calu-3 cells, whereas no increase was observed with heat-inactivated SARS-CoV-2 and virus-cleared conditioned media. Next, using specific siRNA, we downregulated the aGPCR candidates and analysed SARS-CoV-2 entry, replication and infectivity in both cell lines. We observed a significant decrease in the amount of SARS-CoV-2 newly released into the culture media by cells with downregulated ADGRD1/GPR133 and ADGRG7/GPR128. In addition, using a plaque assay, we observed a reduction in SARS-CoV-2 infectivity in Calu-3 cells. In summary, our data suggest that selected aGPCRs might play a role during SARS-CoV-2 infection of mammalian cells.

摘要

粘附 G 蛋白偶联受体 (aGPCRs) 在神经发育、免疫防御和癌症中发挥着重要作用；然而，它们在病毒感染中的作用在很大程度上尚未被探索。我们一直在寻找参与 SARS-CoV-2 感染哺乳动物细胞的特定 aGPCR。在本研究中，我们用 SARS-CoV-2 感染源自肺腺癌 (Calu-3) 和结直肠癌 (Caco-2) 的人上皮细胞系，以便在感染后 6 和 12 小时分析编码个体 aGPCR 的 mRNA 水平的变化。基于显著改变的 mRNA 水平，我们鉴定了四个 aGPCR 候选物 - ADGRB3/BAI3、ADGRD1/GPR133、ADGRG7/GPR128 和 ADGRV1/GPR98。在这些受体中，ADGRD1/GPR133 和 ADGRG7/GPR128 在感染 SARS-CoV-2 的 Calu-3 细胞中的 mRNA 水平增加最大，而热灭活的 SARS-CoV-2 和病毒清除的条件培养基则没有观察到增加。接下来，使用特异性 siRNA，我们下调了 aGPCR 候选物，并在两种细胞系中分析了 SARS-CoV-2 的进入、复制和感染性。我们观察到下调 ADGRD1/GPR133 和 ADGRG7/GPR128 的细胞中释放到培养基中的 SARS-CoV-2 新量显著减少。此外，通过噬斑分析，我们观察到 Calu-3 细胞中 SARS-CoV-2 感染性降低。总之，我们的数据表明，选定的 aGPCR 可能在 SARS-CoV-2 感染哺乳动物细胞中发挥作用。

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