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使用生物发光共振能量转移测量和分析哺乳动物细胞中蛋白质相互作用的实验方案。

Protocol to measure and analyze protein interactions in mammalian cells using bioluminescence resonance energy transfer.

作者信息

Duval Carla Jane, Steffen Candy Laura, Pavic Karolina, Abankwa Daniel Kwaku

机构信息

Cancer Cell Biology and Drug Discovery Group, Department of Life Sciences and Medicine, University of Luxembourg, 4362 Esch-sur-Alzette, Luxembourg.

Cancer Cell Biology and Drug Discovery Group, Department of Life Sciences and Medicine, University of Luxembourg, 4362 Esch-sur-Alzette, Luxembourg.

出版信息

STAR Protoc. 2024 Dec 20;5(4):103348. doi: 10.1016/j.xpro.2024.103348. Epub 2024 Sep 28.

DOI:10.1016/j.xpro.2024.103348
PMID:39342617
原文链接:https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11470631/
Abstract

Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) allows to quantitate protein interactions in intact cells. Here, we present a protocol for measuring BRET due to transient interactions of oncogenic K-RasG12V in plasma membrane nanoclusters of HEK293-EBNA cells. We describe steps for seeding, transfecting, and replating cells. We then detail procedures for their preparation for BRET measurements on a CLARIOstar microplate reader and detailed data analysis. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Steffen et al..

摘要

生物发光共振能量转移（BRET）可用于定量完整细胞中的蛋白质相互作用。在此，我们展示了一种用于测量由于致癌性K-RasG12V在HEK293-EBNA细胞的质膜纳米簇中的瞬时相互作用而产生的BRET的方案。我们描述了细胞接种、转染和重新铺板的步骤。然后，我们详细说明了在CLARIOstar微孔板读数仪上进行BRET测量的细胞准备程序以及详细的数据分析。有关此方案的使用和执行的完整详细信息，请参考斯特芬等人的研究。

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